重组抗体制备

重组抗体技术使制备人源化抗体和人源抗体成为可能，而这是其他常规的多克隆或单克隆抗体制备方法所不可能做到的。重组抗体技术多个方面的技术。其中，抗体库技术，包括噬菌体抗体库、细菌和酵母展示的抗体库及其抗体库的筛选技术；重组抗体基因的改造和表达，包括抗体亲和力成熟、抗体人源化改造和稳定性改造，以及抗体基因在原核、酵母、昆虫、哺乳动物细胞中的表达；重组抗体效应功能的提高，涉及双特异性抗体、细胞内抗体。百欧泰生物可以提供重组抗体制备服务，包含的服务项目如下。

（一）噬菌体展示文库

噬菌体展示技术其基本原理是：将编码多肽的外源DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后，以融合蛋白的形式呈现在噬菌体的表面，被展示的多肽或蛋白可保持相对的空间结构和生物活性，展示在噬菌体的表面。导入了各种各样外源基因的一群噬菌体，就构成一个展示各种各样外源肽的噬菌体展示库。当用一个蛋白质去筛查一个噬菌体展示库时，就会选择性地同与其有相互作用的某个外源肽相结合，从而分离出展示库里的某个特定的噬菌体，研究该噬菌体所含外源基因的生物学功能。

技术优势：

省去细胞融合步骤，避免因杂交瘤不稳定而反复亚克隆的繁琐程序，提高库容量；

可筛选出与抗体特异性结果的噬菌体，获得该抗体识别的抗原表位，进行抗原表位分析；

可获得高亲和力的人源化抗体。

（二）纳米抗体制备

纳米抗体（Nanobody）又名单域抗体，它是截取自驼类重链抗体的可变区，只含有一条多肽链（~15KD）的小抗体。重链抗体没有轻链，仅由两条重链组成，并通过重链上的单个可变区结合抗原。纳米抗体的开发不同于传统单克隆抗体通过杂交瘤制备的方法，它一般通过免疫羊驼、构建噬菌体文库和通过噬菌体展示来筛选出候选纳米抗体，再通过纳米抗体表达和纯化后进行与抗原是否结合的验证实验。百欧泰公司具有完善的技术设备和经验丰富的技术人才，我们将为您推荐合适的实验方法来制备纳米抗体。

技术优势：亲合力更高（nM-pM）、特异性强、分子量小、耐高温、可大量生产避免了批次间差异。

（三）重组抗体表达技术

重组抗体利用分子生物学的手段，将抗体的重链和轻链或片段区域克隆到哺乳动物细胞表达载体进行高效表达，得到全长抗体及不同抗体区段的抗体片段。百欧泰生物重组抗体表达服务表达规模灵活可选，交付速度快，可在CHO或HEK293细胞中生产客户所需的目标抗体，并且保证抗体表达量、纯度和期望的内毒素水平。客户只需要提供抗体序列，百欧泰生物结合高表达载体和转染试剂进行重组抗体生成。

 技术优势：制备的抗体性质稳定，抗体基因保存简便；提供从基因合成到重组抗体表达的一站式服务；保证重组抗体表达量、纯度和期望的内毒素水平；交付周期短。

（四）过表达细胞系构建服务

百欧泰建立了一套成熟稳定的基因干扰表达的实验体系，可针对多种不同细胞（包括难转染细胞）为您提供基因过表达稳转细胞株的构建服务。公司具备成熟的细胞实验服务平台，服务内容丰富详细。同时还可为客户提供包括过表达、沉默稳转细胞系构建等多种技术服务。我们能够按照客户的要求完成目的基因过表达细胞株的构建和测试，提供高质量的基因过表达稳定细胞株。

应用范围：上调目的蛋白表达量，研究基因功能；模拟人类疾病；进行药物筛选等。

（五）双特异性抗体制备

双特异性抗体是一类可以同时特异结合两个不同抗原的双功能的抗体分子。至少有30 多种双特异性抗体药物处于临床研究阶段。双特异性抗体在自然状态下不存在，只能通过人工制备。百欧泰经过多年的研究及技术发展，双特异性抗体在结构上出现了许多不同的设计策略。按照其是否含有Fc 功能区，主要分为2 类: 含有Fc 区的双特异性抗体和不含Fc 区的双特异性抗体。

应用范围：介导免疫细胞杀伤；双靶点信号阻断；促进蛋白形成功能性复合体；免疫诊断；临床检测甲胎蛋白、检测癌胚抗原；肿瘤放射显影、肿瘤药物杀伤。

（六）Fc融合抗体制备

Fc融合蛋白是指利用基因工程技术将免疫球蛋白的Fc段与某种具有生物学活性的功能蛋白分子融合而产生的新型蛋白。Fc融合蛋白主要的特点是包含Fc段，与单克隆抗体中Fc段功能类似，融合蛋白的Fc段可以起到延长功能蛋白在血浆内的半衰期、提高分子的稳定性、特异性结合体内的FC受体，并发挥相应的生物学功能等作用。除此之外，Fc段可以特异性结合proteinA，简化了Fc融合蛋白的纯化步骤，在相关生物制品的研发制备具有重要意义。

应用范围：临床药物治疗；新型疫苗；体外活性检测；蛋白微阵列检测。

（七）ScFv/Fab抗体制备

ScFv/Fab抗体为重组抗体，也称为基因工程抗体，是指通过DNA重组技术将抗体相应的基因序列根据需要进行改造和重组，并构建在质粒上，再通过蛋白外源表达技术将构建好的质粒转染/转化入适合的宿主细胞表达获得的抗体。百欧泰生物可以提供ScFv/Fab抗体制备服务，具体服务内容包括基因密码子合成及密码子优化、载体构建、表达及纯化、QC分析等。

常用方法：scFv可在多个表达系统中进行表达；Fab片段制备采用酶解法、利用表达系统制备、利用噬菌体展示技术进行抗体库筛选等。

（八）嵌合抗体制备

嵌合抗体制备的原理是从分泌某种鼠单抗的杂交瘤细胞基因组中分离并鉴定出重排的功能性鼠VL和V；经过基因重组分别与人的CL（轻链恒定区）和CH（重链恒定区）基因按照一定的方式相拼接，克隆到表达载体中构建鼠/人轻重链基因表达载体，并转入适当的宿主细胞表达来制备特异性嵌合抗体。百欧泰拥有丰富的嵌合抗体制备经验，提供多种哺乳动物细胞嵌合抗体表达服务，包括同源全长抗体和异源嵌合抗体表达。

实验应用：Westren Blot；ELISA；免疫组化实验；免疫和共沉淀；流式细胞术。

（九）生产型稳定细胞系制备

百欧泰生物提供稳定细胞株构建服务，稳定细胞株构建是指将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。百欧泰建立了一套成熟稳定的细胞体系构建系统，可为客户提供包括过表达、沉默稳转细胞系构建等多种技术服务，按照客户的要求完成目的生产型细胞系的构建和测试。

细胞转染方法：阳离子脂质体转染法；电穿孔法；逆转录病毒转染；腺病毒转染；磷酸钙法；显微注射法。

（十）抗体亲和力成熟

亲和力指数是抗体药物的一个关键参数，影响抗体的功能和药效。亲和力成熟技术是用于提高抗体与抗原亲和力的常用技术，简言之就是提高抗体与抗原结合能力。百欧泰生物在抗体亲和力成熟方面积累了丰富的经验，通常采用单链抗体的形式进行亲和力成熟，同时使用单价噬菌体展示系统降低了淘选过程中低亲和力噬菌体与抗原的结合对筛选结果的影响。

常用方法：错配PCR；DNA改组；链置换；定点突变。

服务优势

1.高成功率：实验成功率高达98%。

2.结果可靠。

3.服务标准：一对一服务，项目进度透明化。

4.抗体制备平台成熟，实验技术无缝对接，保质保量。

5.一站式服务