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蛋白质非标定量(Label free)技术服务

服务编号:BIOFW038-3D

技术简介

蛋白质非标Label free)定量技术是一种不依赖于同位素标记的蛋白质定量技术,该技术依据蛋白质丰度与质谱数据一级谱图肽段峰强度或二级谱图数目呈现一定相关性的原理,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,并对数据进行大规模分析,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。

相比较iTRAQ/TMT等标记方法,Label Free具有特定的技术优势:检测起始样本量少; 前处理少,更多保留样本原始信息;对于低丰度多肽的覆盖程度更高;不受标记试剂盒限制,可进行大批量的样本检测。

 

技术原理

蛋白质非标记定量技术是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析比较质谱分析次数或质谱峰强度,分析不同来源样品蛋白的数量变化,肽段在质谱中被捕获检测的频率与其在混合物中的丰度成正相关,因此蛋白质被质谱检测的计数反映了蛋白质的丰度,通过适当的数学公式可以将质谱检测计数与蛋白质的量联系起来,从而对蛋白质进行定量。

基于质谱的非标记定量方法主要有两种:一种是依据一级质谱相关的肽段峰强度和峰面积等信息进行蛋白定量,另一种是依据蛋白质对应肽段的二级质谱总数进行定量。

 

技术流程

1 蛋白样品准备

2 蛋白酶解

3 液相色谱分离

4 质谱图解

5 生物信息学分析 

蛋白质非标定量(Label free)技术服务.png

技术应用

发病机理研究

药物靶点研究

疾病标志物筛选

工程菌改造

特殊功能蛋白质筛选

 

技术优势

样本需求量少

对样本的处理少,接近样本原始状态

无需昂贵的同位素标签标记,实验耗费低

不受样本条件的限制,克服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷

可以检测到的肽段动态范围达4个数量级以上,提高低浓度蛋白检出率和非标定量的准确性

 

样品要求

常规真菌需要80mg/

常规细菌需要20mg>30uL沉淀/

真菌类样本需求量以酵母为例。若样本为孢子等特化组织,送样量需加倍;菇类大型蕈菌,送样量请参照植物样本需求量100mg/

 

服务流程

双方沟通一致后确定实验方案,确定服务要求-签订合同—预付款-开始实验-成果交付

 

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